AUSÊNCIA DE EFEITO GENOTÓXICO EM CÉLULAS SOMÁTICAS DE DROSOPHILA MELANOGASTER TRATADAS COM BOTOX^â.

Nilza N. Guimarães, Elder S. da Silva, Ígor G. de Oliveira e Kênya S. Cunha. Departamento de Ciências Fisiológicas, ICB, UFG, Goiânia – GO. nilzang@ig.com.br; kênya@icb.ufg.br.

Palavras-chave: Botox^â, teste SMART, genotoxicidade

INTRODUÇÃO

A toxina botulínica do tipo A, princípio ativo do BOTOX^â, é uma proteína produzida pela bactéria anaeróbica Clostridium botulinum, considerada uma das mais potentes e letais toxinas biológicas existentes. Esta substância age sobre terminação nervosa do neurônio pré-sináptico, impedindo a fusão das vesículas contendo neurotransmissor com a membrana axoplasmática e consecutiva liberação do seu conteúdo para a fenda sináptica, causando uma desnervação química.

Este fármaco é atualmente muito indicado para melhora de quadros de espasticidade (em sequelas de paralisias neuronais) e outras patologias como estrabismo, blefaroespasmo, hiperidrose (suor excessivo) das palmas das mãos e das axilas.

A metabolização da toxina não está devidamente documentada, porém pode ser explicada pela presença de proteases que levam a uma proteólise e degradação das cadeias polipeptídicas presentes na molécula. Até o presente momento não foram realizados estudos prolongados em animais com a finalidade de se avaliar o potencial carcinogênico do BotoxÒ. Parâmetros relacionados com a indução de mutação gênica, mutação cromossômica e/ou recombinaçao mitótica são eventos que podem contribuir significativamente para o surgimento de neoplasias. Deste modo, para avaliar o potencial genotóxico do BotoxÒ, utilizamos o Teste Para Detecção de Mutação e Recombinação em Células Somáticas de Drosophila melanogaster (SMART).

METODOLOGIA

SOMATIC MUTATION AND RECOMBINATION TEST (SMART):

Neste trabalho, larvas de terceiro estágio, obtidas a partir do cruzamento de fêmeas virgens da linhagem flr³ com machos mwh, foram tratadas com BOTOX®, por um período de 48 horas, até atingirem o estágio de pupa. As larvas foram colocadas em 5 tubos, contendo diferentes concentrações da toxina botulínica, até transformarem-se em adultos. As asas dos indivíduos trans-heterozigotos foram retiradas para a análise dos tricomas presentes em ambas as faces, com o intuito de observar a presença ou não de pêlos mutantes. O fenótipo mutante indica a ocorrência de mutações e/ou recombinações mitóticas. A análise estatística foi feita comparando os resultados das diferentes concentrações com o controle negativo (água destilada). O diagnóstico estatístico foi obtido através do teste binomial condicional, seguindo o procedimento de múltiplas decisões de acordo com Frei e Würgler (1988).

RESULTADOS E DISCUSSÃO

A análise microscópica dos pêlos mutantes, presentes nas asas dos adultos trans-heterozigotos, revelou que o Botox^Ò não foi capaz de induzir eventos de mutação e/ou recombinação nas doses utilizadas. Este resultado foi obtido a partir da aplicação do teste estatístico binomial condicional, como pode ser visto na tabela abaixo:

Tabela: Resultados da avaliação genotóxica do Botox^Ò através do cruzamento padrão.

Dose (U)	Número de Indivíduos	Manchas por indivíduo (nº de manchas)				Diagnóstico Estatístico
		MSP (1-2 cels) m=2	MSG (>2 cels) m=5	MG M=5	TM m=2
Controle positivo	9	11,67(105)	7,11(64)	3,67(33)	22,44(202)
Controle negativo	11	0,45(05)	0,09(01)	0,00(00)	0,55(06)
2	12	0,42(05)	0,08(01)	0,00(00)	0,50(06)	ns
4	12	0,33(04)	0,00(00)	0,00(00)	0,33(04)	ns
6	12	0,33(04)	0,08(01)	0,00(00)	0,42(05)	ns

MSP, manchas simples pequenas; MSG, manchas simples grandes; MG, manchas gêmeas; TM, total de manchas; ns, diagnóstico estatístico não significativo.

Estes resultados demonstraram que, nestas condições experimentais o BotoxÒ não foi capaz de induzir atividade genotóxica direta, não sendo, conseqüentemente, um agente indutor de mutação pontual, mutação cromossômica e recombinação mitótica.

CONCLUSÃO

Através da utilização do teste SMART, com análise microscópica dos fenótipos mutantes dos pêlos presentes nas asas dos adultos trans-heterozigotos e do diagnóstico estatístico obtido através do teste binomial condicional, conclui-se que o BotoxÒ não possui efeito mutagênico e/ou recombinogênico em células somáticas de Drosophila melanogaster.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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FONTE DE FINANCIAMENTO: CNPq