Centro de Pesquisa em Alimentos da Escola de Veterinária da UFG. mepmartins_vet@hotmail.com

Palavras-chave: Azidiol, CBT, leite, temperatura

A qualidade do leite cru pode ser avaliada por meio de diferentes parâmetros. A contagem bacteriana total (CBT) é um dos parâmetros mais importantes para se determinar a qualidade do leite. A concentração bacteriana no leite reflete sobre a saúde da vaca, a higiene de ordenha e dos equipamentos utilizados, as condições de armazenamento, refrigeração e transporte do leite, bem como sobre a produtividade. O leite com elevada CBT resulta em produtos derivados com menor vida de prateleira, menor rendimento industrial, além de alterações das características organolépticas. Logo, traz conseqüências ao valor nutricional do leite, como matéria-prima para as empresas de laticínios, e por extensão, a remuneração do produtor, interferindo na percepção de qualidade do leite e derivados pelo consumidor, acarretando em negativo impacto econômico na cadeia agroindustrial do leite (FONSECA & SANTOS, 2000; HILLERTON, 2000; INFORMATIVO..., 2001).

A contagem de microrganismos aeróbios e/ou facultativos mesófilos viáveis consiste no método mais empregado na avaliação da contaminação do leite, sendo mundialmente referenciada (RUEGG & REINEMANN, 2002).

A metodologia internacionalmente utilizada para se determinar a CBT é a contagem padrão em placas, técnica esta que possui alto custo e baixo rendimento analítico. Com os avanços na indústria de equipamentos analíticos, novas tecnologias vem sendo incorporadas trazendo com sigo o desenvolvimento de metodologias e equipamentos automatizados, a exemplo da citometria de fluxo para determinação de CBT. A metodologia eletrônica, quando comparada à convencional, apresenta vantagens principalmente em relação à rapidez, repetibilidade e praticidade, já sendo adotada oficialmente em vários países (LACHOWSKY et al., 1997; HENRIKSEN, 1998; RUEGG & REINEMANN, 2002).

Entretanto, as metodologias precisam de adequação e os utensílios e reagentes utilizados ainda necessitam de maiores esclarecimentos visando a maior eficiência e viabilidade das análises.

Este projeto pretende estudar diferentes conservantes e condições de armazenamento de amostras de leite cru para a determinação de contagem bacteriana total (CBT). Dentro deste contexto geral pretende-se ainda: avaliar a vida útil do azidiol, bem como a interferência do acréscimo de corante na amostra sobre a CBT; avaliar o tempo entre colheita e análise da amostra, conservadas em diferentes temperaturas; avaliar o grau de influência do bronopol na CBT; verificar se há diferença entre o efeito do azidiol líquido e comprimido; avaliar se há diferença entre a utilização de frascos esterilizados e re-utilizados limpos

Amostragem

Serão colhidas 30 amostras de leite bovino provenientes de propriedades rurais num raio de 150 km de Goiânia-GO. Amostras de um litro de leite serão colhidas em balões volumétricos esterilizados e transportadas ao laboratório devidamente acondicionadas sob refrigeração. Cada amostra de um litro representará uma propriedade e posteriormente estas serão fracionadas de acordo com as metodologias testadas e testes adicionais. O leite será colhido segundo recomendações da IDF (1995).

As análises serão realizadas no Laboratório de Qualidade do Leite, localizado no Centro de Pesquisa em Alimentos da Escola de Veterinária da Universidade Federal de Goiás. A metodologia empregada será a citometria de fluxo e o equipamento Bactoscan FC, para contagem individual de bactérias (CIB).

Fatores avaliados

Os fatores avaliados serão quatro níveis de temperatura de conservação (temperatura ambiente controlada a 25 ºC, 15 ºC, 10 ºC e 5 ºC), seis metodologias de utilização de conservantes (bronopol, azidiol líquido, azidiol líquido + corante, azidiol comprimido, frasco re-utilizado com azidiol líquido e controle), aferidos em dez tempos entre colheita e análise das amostras no laboratório.

Alíquotas de 40 ml serão retiradas de cada amostra de um litro de leite e distribuídas em frascos padronizados para a adição dos conservantes e, caso seja o azidiol comprimido será adicionado um comprimido, caso seja o azidiol serão instiladas quatro gotas. Cada litro será fracionado em 24 frascos.

Serão selecionados rebanhos com baixa CBT (<100 mil UFC/ml), com média CBT (101 mil a 1000000 UFC/ml) e com alta CBT (> 1000000 UFC/ml), para que seja avaliado o impacto dos fatores em diferentes níveis de CBT. Cada 10 litros de leite representarão um nível.

Imediatamente à chegada ao laboratório, serão realizados testes para identificar a presença de inibidores de crescimento bacteriano nas amostras de leite para resíduos antimicrobianos, H2O2 e NaOH.

Procedimento Analítico

As amostras não refrigeradas permanecerão à temperatura ambiente. Amostras destinadas à CBT não serão aquecidas antes da análise.

As análises serão realizadas em partidas representando períodos intercalados de dez dias, considerando-se a classificação em rebanhos de baixa, média e alta contagem bacteriana. Cada partida, correspondente a um nível classificatório, será composta de 240 sub-amostras e analisada durante dez dias consecutivos.

Contagem bacteriana total (CBT)

A CBT será realizada utilizando-se o Bactoscan FC, com capacidade de análise de 50 amostras/hora, e cujo princípio analítico baseia-se na citometria de fluxo.

Após ser automaticamente pipetada para dentro do equipamento, uma alíquota da amostra é incubada a 50ºC por 8 minutos, onde é misturada com os reagentes, ocorrendo a coloração do DNA bacteriano pelo brometo de etídio e a lise de células somáticas e componentes do leite. Transcorrido o tempo de incubação, a alíquota é transferida para célula de fluxo, onde um raio laser incide sobre as bactérias coradas, proporcionando a emissão de pulsos luminosos. Estes pulsos são detectados, contados e o resultado expresso no monitor equivale ao número de bactérias por microlitros de leite. Empregando-se um fator de correção, obtem-se o resultado em UFC/mL.

Análise estatística

Considerando-se o proposto será considerado o delineamento inteiramente ao acaso, sendo os dados obtidos interpretados segundo "Statistical Analysis System" (SAS, 1990), empregando-se o procedimento GLM para determinação da análise de variância e o teste de Tukey, ao nível de significância de 5% para comparação das médias.

Espera-se contribuir na otimização da rotina de trabalho do Laboratório de Qualidade do Leite do Centro de Pesquisa em Alimentos da EV/UFG assim como para a rede nacional de qualidade do leite, possibilitando aos técnicos, que trabalham com contagem bacteriana total pela metodologia automatizada, uma melhor visão a respeito dos dados gerados e da confiabilidade dos mesmos com relação à realidade da produção da matéria-prima.

FONSECA, L.F.L.; SANTOS, M.V. Qualidade do leite e controle de mastite. São Paulo: Lemos Editorial, 2000. 175p.

HENRIKSEN, P. Aparatos, para el recuento rápido de células somáticas em la leche cruda. In: PANAMERICAN CONGRESS ON MASTITIS CONTROL AND MILK QUALITY, 1., 1998, Merida. Proceedings... Merida: [s.n.], 1998. p. 356-357.

HILLERTON, E. Contagem bacteriana no leite: importância para a indústria e medidas de controle. In: SIMPÓSIO INTERNACIONAL SOBRE QUALIDADE DO LEITE, 2., 2000, Curitiba. Anais... Curitiba: UFPR, 2000. p. 59-65.

INFORMATIVO DA QUALIDADE. Belo Horizonte: Itambé, a.1, n.1, p. 2-3. 2001.

INTERNATIONAL DAIRY FEDERATION. Milk and milk products-Methods of sampling Bruxelas: 1995 (IDF Standard 50 C).

LACHOWSKY, W.M.; McNAB, W.B.; GRIFFITHS, M.; ODUMERU, J. A comparison of the Bactoscan 8000S to three cultural methods for enumeration of bacteria in raw milk. Food Research International, Ottawa, v.30, n.3-4, p.273-280, 1997.

RUEGG, P.L.; REINEMANN, D.J. Milk quality and mastitis tests. The bovine Practitioner, Stillwater, v.36, n.1, p.41-54, 2002.

SAS Institute. The SAS System for Windows. [CD-ROM], North Carolina State University, 1990. Statistical software.